Vitamin B12 in EDTA-Plasma im Bereich Klinische Chemie mit dem Verfahren Ligandenassays mittels ECLIA am Roche Cobas e801

Messgrößen / Analyte / Parameter im LIS

Analysen-Nr. / Analyt-Code (LIS)

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Untersuchungs- bzw. Prüftechnik / Arbeitsplatz

• Elektrochemilumineszenzassay [Dok.-Nr. 1002476]

Dauerhaft an ein Auftragslaboratorium vergeben?

• nein

Bezeichnung der Meßgrößen (Akkreditierungsstelle)

Vitamin B12

CE-Test

nein

In House Test

nein

Standardverfahren nach Literatur

nein

Untersuchungs- bzw. Prüfgebiet (Akkreditierungsstelle)

• Klinische Chemie [Dok.-Nr. 1002443]

Untersuchungs- bzw. Prüfart (Akkreditierungsstelle)

• Ligandenassays* [Dok.-Nr. 1002456]

Ziel der Untersuchung (Indikation)

Bestimmung des Vitamin B12-Gehaltes in Humanserum und –plasma.

Indikation

• V.a. Vitamin B12-Mangel z.B.
• perniziöse Anämie
• funikuläre Spinalerkrankung,
• chronische Gastritis
• Magen(teil-)resektion
• Vegetarier und Veganer
• berufliche Exposition gegen Lachgas

Prinzip (Methode) des Untersuchungsverfahrens

Elektrochemilumineszenz-Immunoassay (ECLIA)
Anwendung der Elektrochemilumineszenz (ECL) im Sandwich-Prinzip:

• Inkubation 1: Probe, ein biotinylierter, monoklonaler, spezifischer Antikörper und ein mit Ruthenium-Komplex markierter, monoklonaler, spezifischer Antikörper bilden einen Sandwich-Komplex (=Immunoassay IA)
• Inkubation 2: Nach Zugabe von Streptavidin-beschichteten Mikropartikeln wird der Komplex über Biotin-Streptavidin Wechselwirkung an die Festphase gebunden.

Arbeitsablauf (Prozess)

Die Bedienung des Cobas e801 Systems ist im Roche Cobas 8000 Handbuch beschrieben.

Material der Standards / Konzentration

Für jeden Test gibt es ein spezielles CalSet mit 2 Konzentrationsbereichen.

Konzentration der Standards (Anmerkungen)

Die für die Kalibration benötigten Daten sind auf dem Reagenzbarcode und dem Barcode auf dem Flaschenetikett der jeweiligen Kalibratoren enthalten.

Kalibrierungsfrequenz

Eine Neukalibrierung erfolgt:

• Nach Wartungsarbeiten, wenn Teile des Systems ausgewechselt wurden
• Wenn die Qualitätskontrolle außerhalb des zulässigen Bereichs liegt bzw. starke Schwankungen oder Tendenzen aufweist.
• Bei Einsatz einer neuen Testcharge oder nach Anforderung durch das System

Angaben zur Kalibrationskurve

Die vorgegebene Masterkurve wird durch den Einsatz des CalSets an das Gerät angeglichen. Die Ergebnisse werden anhand einer Kalibrationskurve ermittelt. Diese wird durch eine 2-Punkt-Kalibration und eine über den Reagenzbarcode mitgelieferte Masterkurve generiert.

Ergebnisangaben (u.a. Nachkommastellen)

• Ergebnisse zur EDV senden, dort technische Freigabe
• Befundübermittlung durch LIS
• Befundveröffentlichung im KIS

Einheiten im LIS

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Ergebnisangaben (u.a. Nachkommastellen) (LIS)

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Referenzbereiche / Bewertungsgrenze / Therapeutischer Bereich (LIS)

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Referenzbereiche / Bewertungsgrenze / Therapeutischer Bereich (Manuelle Angaben)

Quelle der Referenzbereiche: Angabe des Herstellers (i.d.R Beipackzettel)

Alarmierende Ergebnisse / Grenzwertüberschreitungen

Die Telefon- und Faxgrenzen sind in der Labor- EDV hinterlegt, sowie in der AA "Sofortmitteilung pathologischer Werte", siehe Dok.-Nr. einsehbar.

Probenmaterial (ergänzend zu LIS)

Probenvolumen / Probenmenge

100 µl

Material des Probenbehälters

EDTA-Monovette (2,7 ml)

Störfaktoren

Komponenten und Getestete Konzentration
Bilirubin: kleiner gleich 1112 µmol/L bzw. kleiner gleich 65 mg/dL
Hämoglobin: kleiner gleich 0.621 mmol/L bzw. kleiner gleich 1000 mg/dL
Intralipid: kleiner gleich1500 mg/dL
Biotin: kleiner gleich 205 nmol/L bzw. kleiner gleich 50 ng/mL
Rheumafaktoren: kleiner gleich 1500 IU/mL
IgG: kleiner gleich 2.8 g/dL
IgA: kleiner gleich 1.6 g/dL
IgM: kleiner gleich 1 g/dL

Bei Patienten unter Therapie mit hohen Biotin-Dosen (> 5 mg/Tag) sollte die Probenentnahme mindestens 8 Stunden nach der letzten Applikation erfolgen.
Da normalerweise "Intrinsic Factor" als Bindeprotein in Vitamin B12-Serumtests verwendet wird, können Antikörper gegen "Intrinsic Factor" (verbreitet bei perniziöser Anämie) zu erhöhten Vitamin-B12-Messwerten führen.

Probenstabilität

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LOINC (Logical Observation Identifiers Names and Codes)

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Gerät / Analysensystem

Reagenzien, Kontrollen, Kalibratoren

Reagenz: 07028121190 ELECSYS-Vitamin B12:
Lieferant: Roche
Herstellung / Haltbarkeit: Vebrauchsfertig, Haltbarkeit: ungeöffnet bei 2-8 °C bis zum angegebenen Verfallsdatum; im cobas e801 Gerät: 16 Wochen

Angaben zu Reagenzien, Kontrollen, Kalibratoren

07028121190 ELECSYS-Vitamin B12:

• PT1 Vorbehandlungsreagenz 1, 1 Flasche, 7.3 mL: Dithiothreitol, 1.028 g/L; Stabilisator, pH 5.5.
• PT2 Vorbehandlungsreagenz 2, 1 Flasche, 6.3 mL: Natriumhydroxid, 40 g/L; Natriumcyanid, 2.205 g/L.
• M Streptavidin-beschichtete Mikropartikel, 1 Flasche, 12.4 mL: Streptavidin-beschichtete Mikropartikel, 0.72 mg/mL; Konservierungsmittel.
• R1 "Intrinsic Factor"~Ru(bpy) , 1 Flasche, 18.8 mL: Mit Ruthenium-Komplex markierter rekombinanter "Intrinsic Factor" (Schwein), 4 μg/L; Dicyanocobinamid, 15 μg/L; Stabilisator; Humanserumalbumin; Phosphatpuffer, pH 5.5; Konservierungsmittel.
• R2 Vitamin B12~Biotin, 1 Flasche, 15.8 mL: Biotinyliertes Vitamin B12, 25 μg/L; Biotin, 3 μg/L; Phosphatpuffer, pH 7.0; Konservierungsmittel.

• 06908799190, ProCell II M, 2 x 2 L Systemlösung
• 04880293190, CleanCell M, 2 x 2 L Messzellen-Reinigungslösung
• 07485409001, Reservoir Cups, 8 Gefäße zur Versorgung von ProCell II M und CleanCell M
• 06908853190, PreClean II M, 2 x 2 L Waschlösung
• 05694302001, Assay Tip/Assay Cup Tray, Stapel mit 6 x 6 Magazinen mit jeweils 105 Pipettenspitzen und 105 Probengefäßen, 3 Abfallbeutel
• 07485425001, Liquid Flow Cleaning Cup, 2 Adaptergefäße zur Versorgung mit ISE Cleaning Solution/Elecsys SysClean für Liquid Flow Cleaning Detection Unit
• 07485433001, PreWash Liquid Flow Cleaning Cup, 1 Adaptergefäß zur Versorgung mit ISE Cleaning Solution/Elecsys SysClean für Liquid Flow Cleaning PreWash Unit
• 11298500316, ISE Cleaning Solution/Elecsys SysClean, 5 x 100 mL System-Reinigungslösung
• Alle Reagenzien sind von der Firma ROCHE.

Externe Leistungsmerkmale

INSTAND 4x jährlich Gr. 290 (Vitamine 01 - Serum)

Validierungs- bzw. Verifizierungsdaten

Die Methode wurde gegen den Elecsys Vitamin B12 Test standardisiert.
Die Validierung der Methode(n) erfolgte durch:

• Ermittlung der Präzision und Richtigkeit an 20 Tagen
• Vergleich mit der Vorgängermethode unter Anwendung der Passig-Bablock-Regressionsanalyse (sofern zutreffend)
• Die Unterlagen mit den Ergebnissen befinden sich im Ordner "Methodenvalidierung" am Arbeitsplatz.

Fehlerquellen

Proben mit extrem hohen Gesamtproteinkonzentrationen sind für diesen Test nicht geeignet, da es zur Bildung von Protein-Gel im Probengefäß kommen kann.

Anzahl der Kontrollen

2

Kontrollfrequenz

Frequenz der internen Qualitätskontrolle: 2x täglich

Risikofelder

Literaturangaben

• L. Thomas „Labor und Diagnose“ TH Books, 8. Auflage 2012; Vitamin B12: Seiten 711 - 723
• Jeweils aktuelle Packungsbeilagen (Fa. Roche)

Mitgeltende Unterlagen

Änderungen Methoden-SOP

Dok. Nr.	Versionsnummer	Veröffentichungsdatum
1002237	1	20.04.2023

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Änderungen Stammdaten

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